Till sidans topp

Sidansvarig: Webbredaktion
Sidan uppdaterades: 2012-09-11 15:12

Tipsa en vän
Utskriftsversion

Structural analysis of N-… - Göteborgs universitet Till startsida
Webbkarta
Till innehåll Läs mer om hur kakor används på gu.se

Structural analysis of N- and O-glycans released from glycoproteins

Artikel i vetenskaplig tidskrift
Författare P. H. Jensen
Niclas G. Karlsson
D. Kolarich
N. H. Packer
Publicerad i Nature Protocols
Volym 7
Nummer/häfte 7
Sidor 1299-1310
ISSN 1754-2189
Publiceringsår 2012
Publicerad vid Institutionen för biomedicin, avdelningen för medicinsk kemi och cellbiologi
Sidor 1299-1310
Språk en
Länkar dx.doi.org/10.1038/nprot.2012.063
Ämnesord liquid chromatography/mass spectrometry, mass-spectrometry, linked, oligosaccharide, glycosylation, ms, glycomics, disease, cells, identification, profiles
Ämneskategorier Medicinsk bioteknologi

Sammanfattning

This protocol shows how to obtain a detailed glycan compositional and structural profile from purified glycoproteins or protein mixtures, and it can be used to distinguish different isobaric glycan isomers. Glycoproteins are immobilized on PVDF membranes before the N-glycans are enzymatically released by PNGase F, isolated and reduced. Subsequently, O-glycans are chemically released from the same protein spot by reductive beta-elimination. After desalting with cation exchange microcolumns, the glycans are separated and analyzed by porous graphitized carbon liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Optionally, the glycans can be treated with sialidases or other specific exoglycosidases to yield more detailed structural information. The sample preparation takes approximately 4 d, with a heavier workload on days 2 and 3, and a lighter load on days 1 and 4. The time for data interpretation depends on the complexity of the samples analyzed. This method can be used in conjunction with the analysis of enriched glycopeptides by capillary/nanoLC-ESI-MS/MS, which together provide detailed information regarding the site heterogeneity of glycosylation.

Sidansvarig: Webbredaktion|Sidan uppdaterades: 2012-09-11
Dela:

På Göteborgs universitet använder vi kakor (cookies) för att webbplatsen ska fungera på ett bra sätt för dig. Genom att surfa vidare godkänner du att vi använder kakor.  Vad är kakor?